Ⅰ.茶皂素对血吸虫中间宿主钉螺的杀灭效果

用茶皂素对日本血吸虫中间宿主钉螺进行杀灭实验，初步结果表明：不同类型的茶皂素浸杀成螺、幼螺和螺卵均有较好的杀灭效果。其中茶皂素Ⅰ2.5mg/L，茶皂素Ⅱ、Ⅲ5.0mg/L，浸杀钉螺效果均为100%喷杀成螺所需浓度较高，效果也稍差。茶皂素对淡水鱼类有一定的毒性，但比氯硝胺毒性低得多，茶皂素Ⅰ在1.6mg/L 以下，水温在28℃，48h，鲢鱼全部存活。并且，药物资源丰富，价格低廉，对环无污染，是一种具有开发前景的植物杀螺剂。文中还对不同类型茶皂素的毒性差异原因、施用浓度和方法进行了讨论。

Study on the  Application Saponin in the Prevention and Cure of Shistosomiasis I.Using Tea Saponin as the Mollucicide to Oncomelania ,the Intermediate Host of Schistosmiasis

Zhang Shushang,Zhou LiHong,Zhu Jinhua

(Hunan Institute of Parasitic Disease,Yueyang 414000)

Xia Chuunhua,Zhu Juanfen,LiuRongxiang

(Tea Reaearch Institute,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Hangzhou 310008)

Abstract

According to the experiments on Oncomelania,the intermediate host of Schistosom mansoni,tea saponin, used as the molluscicide,showedeffective efficacy on the adult and juvenile snails and the snail eggs.Mortalities of 100% was obtained by immersing the molluse and their eggs with 2.5-5.0mg/L tea saponin solution,and of 82%-90% by spraying the adult snails with tea saponin under the dosages of 5-20%g/m2.Tea saponin showed much lower toxicity to freshwater fish than Niclosamide,and its easy availability,low price botanieal origin and nonpollution made its broad developing prospects.Toxicity and operation techniques of tea saponin as the molluscicide was detailed.

Key words:Tea saponin,Oncomelania,Toxicity

前    言

日本血吸虫病是一种寄生虫病，已在我国南方12个省市自治区流行，感染血吸虫者达1200万人，有螺面积148万㎡，并且仍在蔓延扩展，严重危害和威胁着我国人民的健康和生命，消灭钉螺是防治血吸虫病的一项重要措施，其中药物灭螺是当前的主要灭螺措施。国内常用的灭螺药物五氯酚钠，对人畜毒性大，有“三致”作用，且污染环境，世界卫生组织已禁止生产和使用。氯硝柳胺杀螺效果虽好，但价格昂贵，其50%可湿性粉达6万元/吨以上，目前经济上难以承受。寻求一种资源丰富，能就地取材，并且对环境无污染的天然植物杀螺剂，已是当务之急。

目前世界上研究的有效植物杀螺剂中，有效成分均为皂甙类物质，如埃塞俄比亚研究所的植物杀螺剂恩多特浆果，我国正在研究的薯蓣科植物。许多植物如山茶科、豆科、毛莨科等均系所含的皂甙成分起杀螺作用。茶皂素是从茶籽饼中提取出来的一种天然植物皂素。现在已经证明，茶皂素在海水里对鱼类等变温动物具有很强的毒性，并且资源丰富，价格低廉。为此，于1993—1994年在实验室进行了茶皂素杀钉螺实验和淡水里的鱼毒性实验，现报告如下：

材料和方法

（一）材料

1、药物  供试药物系云南、浙江、湖南产的茶皂素Ⅰ（含量55.8%），茶皂素Ⅱ（63.3%），茶皂素Ⅲ（含量80%）茶皂素Ⅳ（含量79.5%），以上药物均为黄色粉末，易溶于水，均系中国农科院茶叶研究所综合利用研究室统一提取分析。用药时胺有效成分计算用量。

2、钉螺  成螺和幼螺从岳阳市君山岛湖洲采集。

3、钉卵  为实验室繁殖之4日龄卵，并在体视显微镜下选择泥皮完整，无裂缝之螺卵供实验用。

4、鱼苗  从渔场 购回，置于实验室大水缸内饲养。鲢鱼体长3.3—3.8㎝。

（二）方法

1、浸泡杀螺  将4种不同型号的茶皂素用去氯自来水配成不同浓度药液各

1000ml，每组茶皂素分5个浓度组，以清水为空白对照组，各投放装有50只活钉螺的尼龙袋3袋，在20、25、30℃恒温下，浸杀1、2、3d后，每天取出1袋钉螺，用清水冲洗干净、良干，于第四田用敲击法测定钉螺死活，并用Bliss法计算药物对钉螺的LC50及LC90和显著性检验。

2. 喷杀成螺  取20×40×5㎝搪瓷方盘，内垫一块海绵，在上面做成2㎝厚的泥面，中间留有一直径5㎝的圆孔，将活钉螺放在泥面上，每盘100只，让其活动。4种不同型号茶皂素，每种分3各剂量组，每组2盘钉螺。将药物分别用水溶解，然后用喷雾器将各组药液分别均匀喷洒于方盘内，[喷水量以泥面不积水为原则。定期在方盘内中央孔放少量清水，以保持泥面潮湿，不开裂。喷药后不同时间取出1盘钉螺测定死亡率。

3.浸杀螺卵  4种不同茶皂素按不同浓度分组。用100ml烧杯，每组3杯，每杯投螺卵100个，加入不同浓度药液50ml，分别浸杀3、5、7d后，每天取出1杯，用清水漂洗三次，加清水孵化，观察幼螺孵出率。同时设清水做对照。

4.浸杀幼螺  从现场采集3-4旋幼螺，用吸管分别到50ml烧杯内，每杯放幼螺50只，用滤纸吸干水分尼龙纱封住杯口，防止幼螺爬出，再方到200ml烧杯内，加不同浓度药液200ml，其分组与杀成螺分组相同，每组为2杯，浸杀48h，72h后各取1杯幼螺在解剖镜下，用针刺法测幼螺死亡数。设清水做空白对照。

5.鱼毒实验   从现场购回鱼苗，室内驯养7d，每2天换水1次。选择健康鱼苗，按长江水产科学研究所制订的《鱼类毒性实验暂行规定》方案进行实验。

结     果

1.对成螺的浸杀效果

在25℃恒温下，4种不同型号茶皂素浸杀钉螺48h，结果表明：茶皂素Ⅰ1.25mg/L，茶皂素Ⅱ5.0mg/L、茶皂素Ⅲ5.0mg/L浸杀成螺死亡率均为100%；茶皂素Ⅳ8.0mg/L浸杀，成螺死亡率96%。不同温度下不同类型的茶皂素对钉螺的半数致死浓度LC50见表1。经显著检验，茶皂素Ⅰ优于茶皂素Ⅱ，茶皂素Ⅱ优于茶皂素Ⅳ，其差异均呈显著性（P<0.01），茶皂素Ⅱ于与Ⅲ的杀螺效果无显著差异（P<0.05）。

表1 不同型号茶皂素在不同温度下对钉螺的LC50结果

2.对成螺的喷杀效果

4种不同型号茶皂素在室温25.3℃（22.5-28℃）时，茶皂素Ⅰ5.0g/㎡,茶皂素Ⅱ20g/㎡，茶皂素Ⅲ20g/㎡及茶皂素Ⅳ20g/㎡第七天钉螺校正死亡率分别为84.4，88.9，88.9%和80%，杀螺效果相近，而用量以茶皂素Ⅰ最小，茶皂素Ⅱ和Ⅲ相近，茶皂素Ⅳ次之（表2）。

3.对螺卵的浸杀效果

4种茶皂素在平均室温26.3℃时，浸杀螺卵7d，茶皂素Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ浓度分别为5.0、10.0、10.0、20.0mg/L杀螺卵效果均打100%，以茶皂素Ⅰ杀螺卵效果最好，用量最小；茶皂素Ⅱ和Ⅲ相似，茶皂素Ⅳ次之（见表3）。

表2  4种茶皂素室内喷杀钉螺效果

表3   4种茶皂素浸杀钉螺卵效果

表4 4种茶皂素浸杀幼螺的效率

4、对幼螺的浸杀效果

4种不同类型茶皂素在平均室温29.4℃（25-33℃）时，茶皂素Ⅰ 1.25mg/L，茶皂素Ⅱ5.0mg/L，茶皂素Ⅲ5.0mg/L，茶皂素Ⅳ5.0mg/L，杀幼螺效果分别为100%、96.2%、100%和69.0%，其中以茶皂素Ⅰ最好，茶皂素Ⅱ和Ⅲ相似，茶皂素Ⅳ次之（见表4）。

5、鱼毒实验结果

在平均室温28℃时，茶皂素Ⅰ 1.25mg/L使鲢鱼全部死亡，而在1.6mg/L以下全部存活；茶皂素Ⅱ和Ⅲ5.0mg/L时，48h内鲢鱼全部死亡，而4.0mg/L 以下，则全部存活；茶皂素Ⅳ10.0mg/L，使鲢鱼全部致死，而在5.0mg/L以下全部存活。

讨    论

4种不同类型的茶皂素对日本血吸虫中间宿主钉螺的杀灭效果实验、结果表明，茶皂素对钉螺的杀灭效果是肯定的。无论是成螺、幼螺和螺卵，在茶皂素浓度2.5-10mg/L范围内，其浸杀效果均可达100%，这与以往有关实验基本一致。

但是，本实验发现4种类型的茶皂素对钉螺的杀灭效果不同，甚至差异很大，无论是成螺、幼螺或螺卵呈同一趋势，同时还发现4种茶皂素对淡水鱼类的毒性亦不尽相同，值得提出来加以讨论。

从实验结果看，茶皂素Ⅰ杀灭钉螺效果最好，浸杀浓度2.5mg/L其效果能达100%，茶皂素Ⅱ、Ⅲ次之，浸杀浓度5.0mg/L其效果才能达到100%，茶皂素Ⅳ浸杀浓度8.0mg/L，其效果只能达到96%，根据已有的研究结果分析，这可能与茶皂素原产地的茶树品种有关，这4种茶皂素是属不同产地的茶籽种提取出来的。产地不同，品种也不一样，如茶皂素Ⅰ属云南大叶种乔木型茶树，其种子中的茶皂素的化学结构在品种之间存在差异，茶籽皂素本身由7种结构及比例不同的甙元所组成的混合物。

研究表明，皂甙类物质溶血作用或毒性的强弱与化学结构有密切关系，尤其是与糖体部分有关。但皂甙溶血作用明显，酰化糖、呋喃缁醇双皂甙和中性三萜双皂甙的作用较弱，甚至无作用。皂甙元与糖体部分呈酸性的单皂甙和双皂甙的活性则呈中等。三萜类皂甙元的A环上极性基因较强，D和E环上取代基极性较弱，溶血作用强。关于这一点，在Mott对埃塞俄比亚的恩多特浆果三萜皂甙的结构分析中亦得到证实，其杀螺效果与提取时糖链在配基的位置有关。而据已有研究表明，茶皂素的糖体部分在配基A环C-3位上以双皂甙存在。这是个值得今后探讨的问题。

茶皂素对人畜口服无毒；对对虾无毒杀作用；在水中48h能自动分解，对淡水鱼在5mg/L以下无毒杀作用。本实验以链鱼为材料在浸杀条件下，茶皂素Ⅰ在1.6mg/L以下，茶皂素Ⅱ和Ⅲ4.8mg/L，48h后全部存活，茶皂素Ⅳ在5.0mg/L亦无毒杀作用。这样更为在鱼类得到保护的情况下达到杀灭钉螺提供了可能。

根据上述结果，兼顾到保护淡水鱼类资源，茶皂素在水体中用于灭螺的浓度，一般以3.0-5.0mg/L为宜，在华南、中南二区域可采用浙江、湖南、江西等地所产茶籽饼粕提取的茶皂素；在西南如云、贵、川等地可采用云南所产茶籽饼粕提取的茶皂素，但其使用浓度宜控制在2-3mg/L 。至于使用方法，因各地条件不一，使用习惯不一样，以本实验而论，以采用浸杀灭螺效果较好。